====== 脱ロウ ======

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脱ロウ処理
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蝋物質を取り除く処理。脱脂も兼ねる。
蝋物質が残っていると奇麗な標本にはならない。

文献に載っている方法では[[xylene]]と[[phenol]]の混合液等が使われるのだけど、
できるだけ安全に処理できるように別の方法を模索している。
加温すれば特に[[phenol]]を使わなくても問題無いように思う。
ただし揮発性が高いので､漏れの少ない[[soaking tube]]を使う。
蝋物質が少ない場合は加温しなくても良い。

===== 道具 =====

  * [[soaking tube]]
  * [[dewaxing agent]]
  * [[etoh:99]]。[[:ipa]]でも可。
  * [[:microtube holder]]。
  * 細口と太口[[:pipette]]
  * [[:hot plate]]


===== 手順 =====

蝋物質が無いと思われる場合も脱脂の意味もあるので行うこと(加温しない方法で良い)。
-> やらなくて良い場合もある。

ロウ物質が多い場合は加温する。
加温する場合は[[soaking tube]]を使う。
加温しない場合は[[soaking dish]]で良い。


==== 蝋物質が多い場合(加温する) ====

(1) 前処理が[[maceration]]や[[acidification]]等脱水されていない場合は、[[dehydration agent]]で2回ほどすすぐ。容器のフタなどについた水分も拭っておく。

(2) 検体を[[:soaking tube]]]に移動する。具体的には溶媒ごと太口[[pipette]]で移動するか、チューブに[[etoh:99]]を少量入れて[[microbrush]]で移動する等の方法で行う。
その後溶媒を細口[[pipette]]で慎重に[[decantation]]する。

(3) [[dewaxing agent]]を100〜500μL程度加える(検体の量とかワックスの量にもよる)。

(4) [[:soaking tube]]のフタをしめて60℃程度に加温し1時間ほど静置する。
その後あるいは途中で[[stereo microscope]]で観察して溶けているようだったら終了する。

(5) 少し冷ます。
[[dewaxing agent]]が少なかった場合、どろどろしたグリース状になりピペットで吸い取れないので､
その場合は[[dewaxing agent]]を追加して振ればさらさらになる。
薄いワックスの膜が見られるようなら、[[dewaxing agent]]で何回かすすぐ。


==== 蝋物質が少ない場合(常温で処理) ====

加温しないので[[soaking tube]]に移動する必要はないが、
あまり長時間[[soaking dish]]に置いておくと蒸散してしまうので注意。

(1) 容器のフタとかに付いている水分をティッシュペーパー等で除去する。

(2) [[dehydration agent]]を注意深く(検体を吸い込まないように)[[:decantation]]する。

(3) [[dewaxing agent]]を200μL〜500μL程度加える。容器によっては多めにしておいた方が良いかもしれない。

(4) 常温で1時間ほど静置する。-> たぶんそんなにいらない。
その後あるいは途中で[[stereo microscope]]で観察して溶けているようだったら終了する。



===== 注意点 =====

どの薬品も引火性が高いので火災には十分注意すること。



===== 備考 =====

容器について。
[[:pp]]は一般的には[[:xylene]]に耐性が無いとされているので､
使用後は中の薬液を排出して乾燥しておいた方が良いと思う。
また壊れる前に定期的に交換した方が良いかもしれない。
その意味ではガラス製のフタ付きの小さな[[test tube]]が良いのだろうけど､適当なものが見つからない。

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===== 関連事項 =====

  * [[dewaxing:study]]


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===== 参考文献 =====
~~REFNOTES~~
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===== Backlinks =====
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===== TODO =====
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