====== 軟化処理に関する調査 ======

検体を強アルカリに浸漬し外皮を残して中の組織を溶かす処理。

===== 用語 =====

  * 軟化
  * maceration

===== 調査 =====

文献に書かれている情報

**[(brown2006>>direct:yes)]**

昆虫全般。
10% KOH、 80℃、5〜10分。

> <wrap :en>Maceration of body contents is carried out by warming to around 80°C in a 10 % Potassium Hydroxide solution (an alkali) for 5-10 minutes or longer, until visible contents have become translucent. A small puncture may be made in the ventral surface of each specimen in order to speed up this and subsequent processes, and to help prevent osmotic collapse. [(brown2006>>page:16)]</wrap>

**[(eppo2004>>direct:yes)]**

コナジラミ。KOH、80℃、5〜10分。

> <wrap :en>Add approximately 1 mL of KOH and heat to around 80 °C for 5–10 min, or until the specimens lose most of their colour. The length of time required varies considerably depending on the species, body size, wax secretions, how long the specimens have been preserved in alcohol, the particular instar and maturity. Pupal cases require little maceration. Puparia require longer and the process is helped by making a small ventral incision using a mounted needle. [(eppo2004>>page:288)]</wrap>

**[(henderson2011>>direct:yes)]**

カイガラムシ。10% KOH、95℃、3〜5分。
試験管かぁ。

> <wrap :en>Hot water bath maceration in 10% KOH. Transfer the scales to a clean heat resistant glass tube (test tube) which has about 1 cm depth of 10% KOH in it; put a bung of cotton wool in the top. Place the tube in a water bath (about 95℃) and heat for between 3 and 5 minutes, or until the scale body becomes pale/clear. [(henderson2011>>page:17)]</wrap>


**[(kondo2022>>direct:yes)]**

カイガラムシ 。10%　KOH 、室温で一晩の後60℃で。


> <wrap :en>Place specimens in 10% potassium hydroxide (KOH) and leave at room temperature overnight (overheating can damage the insect cuticle) or heat at 60 °C until the body contents become translucent and droplets of liquified fats become visible through the cuticle; the body contents should be expelled carefully using a microspatula and/or a blunt mounted needle or a small paint brush.  [(kondo2022)]</wrap>

**[(miyazaki1987>>direct:yes)]**

アブラムシ。10% KOH、 室温〜90℃。50℃で30分から2時間。

> 体の内容物を溶かすため,10%KOH溶液に浸漬する。処理容器は容量5m/程度の磁製るつぼか，ガラス製秤量瓶のようなものが手ごろであるが，管瓶や小型の試験管などでもよいであろう。室温下でも構わないが，50～90C程度に加温できれば処理が早く済む。加温には恒温器やホットプレートを利用する。処理時間は虫の大きさや状態によって異なり,50Cで30分ないし2時間程度。内容物が透き通ってくればそれでよい。 [(miyaxaki1987>>page:27)]


**[(schauff2001>>direct:yes)]**

NaOHはいいぞ。

> <wrap :en>Although textbooks specify potassium hydroxide (KOH) for maceration, this chemical must be used cautiously because specimens may be easily and quickly damaged or completely ruined in it. NaOH will perform as well as KOH or even better.  [(schauff2001>>page:40)]</wrap>


**[(sirisena2013>>direct:yes)]**

腹吻。10% KOH、室温で一晩あるいは60℃。
kondo2022と似てるな。ソース同じかも。

> <wrap :en>Maceration: Specimens were placed in 10% potassium hydroxide (KOH) at 60 °C, or at room temperature overnight followed by heating, until the body contents became transparent and liquified fat accumulated under the uppermost cuticle. Then the contents were all carefully expelled using a microspatula and a blunt mounted needle. If necessary, the hole in the cuticle was slightly enlarged to make the expulsion of solids easier.  [(serisena2013>>page:141)]</wrap>

**[(takagi1970>>direct:yes)]**

アブラムシ。

> カセイカリ水溶液: 一般に5〜10%の濃度で、用いる水は蒸留水が望ましいが良質の地下水でも良い。[(takagi1970>>page:393)]

> 夕刻材料をカセイカリ水溶液に投じ、一晩室温で放置する。容器はルツボを用い必ずふたをしさらにシャーレに収容した方が安全である。ただし乾燥材料は翌日の操作のためガラス皿を用いた方がよい。この場合もガラス板でふたをしておく。2日目の朝、材料を前日のままサーモスタットで60〜70℃で30分から1時間加熱する。…　[(takagi1970>>page:394)]

**[(tanaka1967>>direct:yes)]**

**[(tanaka2014>>direct:yes)]**






<WRAP tdl right 40%>{{dishes:ps_beads_container.jpg?400x300}}
[[:pandahall_ps_beads_container]]
</WRAP>
===== 容器 =====

以下のようなものが良い。

  * 強アルカリに対して耐性がある材質であること。
  * 底が丸い形状である方が良い。
  * 穴径は 22〜30mm ぐらい。
  * 深さは、深さ/径 = 0.2〜0.5ぐらい。深いと実体顕微鏡を見ながら排液などの作用をするのが難しくなる。浅いと少し傾けただけでフタに検体が付いてしまい往生する
  * 容量は3~10mL程度? 検体の大きさにも依る。
  * 加温する場合は、ふた付きであること。ガラス板の場合は防漏処理を行った方が良い(開発中)。
  * できるだけ透明の方が良い。暗視野透過照明の方が状態確認がしやすい。

文献では、**磁器製の[[:crucible]]**や**ガラス**製の容器を挙げている文献もあるが、
ルツボは深くて不透明なので使い勝手は悪いと思う。
またガラス製はアルカリに侵されるので(速度は遅いが)避けた方が良いと思うのだが、[[:borosilicate glass]]は大丈夫なのか?

今のところ一番良いと思えるのは[[:pandahall_ps_beads_container]]
ではないかと思うがまだあまりテストしていない。

<WRAP clear/>

===== 処理液 =====

文献にあるように一般的には[[:koh]]が使用されるが、[[:naoh]]でも良い。
両者に特に差はないという意見と[(tanaka1967>>page:374)]、NaOHの方が良いという意見があった[(schauff2001)]。
濃度は10%が標準的だが、5〜10%程度で良い。
おそらくもっと薄くても大丈夫(確認!!)。

アルカリ電解水でもできるという噂が。
じゃぁ、重曹とかでもできるのだろうか?
コナジラミの中には加温して8時間ぐらい掛かるのがいるけど、そいつらにも使えるのかな。


-> TODO
きわめて、短時間で進行するケースがあって、そういう場合はもっと緩いアルカリでもいのかもしれない。

===== 温度と時間 =====

常温、あるいは加温して行なわれる。
常温で長時間処理した後、短時間加温する方法もあるようだ([(takagi1970)], [(sirisena2013)])。
温度は文献には90℃とかも出てくるが、そんなに上げない方が良いと思う。
液温で50℃ぐらいか?(設定温度と容器内の温度は異なる)
やり過ぎると外皮まで溶かしてしまう。これはやり直せない。

種による違いだけでなく、
採集時期(幼虫/蛹殻/脱皮直後)や保存状態にも依るので、
かなり広い範囲で処理時間を調整しなければならず難しい。
詳しくは、[[:specific]]毎の解説で述べたい。

文献には針で穴を開けるようなことが書かれているが、私は(初期の頃やってたが)現在やってない。

===== 参考文献 =====
~~REFNOTES~~

<WRAP hide>
  * [[refnotes:brown2006]]
  * [[refnotes:eppo2004]]
  * [[refnotes:henderson2011]]
  * [[refnotes:kondo2022]]
  * [[refnotes:miyazaki1987]]
  * [[refnotes:schauff2001]]
  * [[refnotes:sirisena2013]]
  * [[refnotes:takagi1970]]
  * [[refnotes:tanaka1967]]
  * [[refnotes:tanaka2014]]
</WRAP>

===== Backlinks =====
{{backlinks>.}}

<WRAP hide><nowiki>
===== TODO =====
</nowiki></WRAP>