差分

このページの2つのバージョン間の差分を表示します。

--- dewaxing [2025/02/22 20:04] – Konajirami-ya
+++ dewaxing [2026/03/17 03:58] (現在) – Konajirami-ya
@@ 行 1: / 行 1: @@
-====== 脱脂・脱ロウ ======
+====== 脱ロウ ======
-<WRAP center round todo 60%>
+<WRAP tdl right 40%>{{:preparation:dewaxing-2.jpg?400x300|}}</WRAP>
-工事中
+蝋物質が残っていると生物顕微鏡で奇麗に見えないので､これを取り除く。
-ここはある程度完成した方法について書く。
+蝋物質は[[:xylene]]や[[:d-limonene]]で溶かすことが出来る。
-調査中のグダグダは[[dewaxing:study]]に書く。
+それに脱水剤の意味で少量の[[:ethanol]]か[[:ipa]]を加えたものを薬液として使う。
-</WRAP>
+常温ではすごく時間が掛かりそうなので80℃程度の湯煎にする。
+順序としては[[:preparation:removing]]の次に行う方向でテスト中。
-脱脂と脱ロウを以下ではまとめて脱ロウと呼ぶ。
+===== 道具 =====
-コナジラミの蛹殻の場合は常に行う。
+  * 処理容器。2mL程度の[[:polypropylene]]製[[:microtube]]、あるいはガラス製[[:test tube]]を使う。[[:microtube]]はスクリューキャップ式でもプッシュキャップ式でも良い。試験管の場合は脱脂綿(ティッシュペーパーでも可)でフタをする。
-脱皮殻とか不要かなと思う場合もあるが一応やってる。
+  * [[:xylene]]か[[:d-limonene]]
+  * [[;ethanol]]か[[:ipa]]
+  * [[:microtube holder]]。洗濯バサミでも可(使えるものと使えないものがあるかもしれない)。
+  * 細口と太口[[:pipette]]
+  * 鍋と水と温度計とコンロ
-===== 関連事項 =====
-  * [[dewaxing:study]]
+===== 手順 =====
-===== 順序 =====
+(1) 検体を太口[[:pipette]]で処理容器に[[:specimen transferring|移動]]後。媒体を[[:decantation]]する。
+(2) 水分を除くため、[[:ethanol]]か[[:ipa]]ですすぐ。具体的には[[:ethanol]]等を100μLほど加えて軽く振り､細口[[:pipette]]で[[:decantation]]する。検体を吸い込まないように注意すること。
-  * [[maceration]]
+(3) [[:xylene]]か[[:d-limonene]]を50〜200μL程度加える。脱水剤の[[:ethanol]]か[[:ipa]]を1滴ぐらい加える(すすいだときの残りがあるので新たに追加しなくても良いかもしれない)。
-  * [[bleaching]] (オプション)
-  * ここ
-  * [[staining]] (オプション)
-  * [[dehydration]]
-  * ...
-===== 方法 =====
+(4) 容器にフタをして、80℃程度の湯煎にする。
+時間は水から入れた場合80℃になった時点でだいたい溶けていると思うが、それから1分ぐらいおく。
-私は[[xylene]](おそらく代替品でも可)、[[:acetic acid]]、無水[[:ethanol]]の混合液に
+(5) 少し冷ます。
-加温して10分から1時間ほど(?)浸けているが、
+薬液が少なかった場合、どろどろしたグリース状になるので、
-危険なので加温しないでうまくいくか調べてみたい。
+その場合は[[:xylene]]か[[:d-limonene]]を追加して振ればたぶん溶ける。
-試薬の割合や時間などは未調査。
-量は全体で0.5mLくらいでやってたと思うが、
+(6) 次の工程で使用する容器に[[:specimen transferring|移動]]し、[[:decantation]]する。
-検体の大きさや、ワックスの涼夜、容器の形状にも依ると思う。
-おそらくもっと増やした方が良いかもしれない。
-最初シュワシュワと反応しているのが見られるが、
+===== 注意点 =====
-反応が無くなったらしばらくおいて終了する。
-やり過ぎても問題ない。
+どの薬品も引火性が高いので火災には十分注意すること。
+===== 備考 =====
+溶剤は[[d-limonene]]が入手しやすく、人体への害も少なそうなのでオススメ。
+容器は耐薬品性、透明性の点でガラス製の方が良いと思うが、
+検体がくっつきやすいことと、
+細長いものが多く､[[:specimen transferring]]用のピペットとして細いもの([[:pasteur_pipette:luer]])が必要になるかもしれない。
+試験管より短いダーラム管というものが存在するので､もし購入するならそちらが良いかもしれない(未テスト)。
+[[:polypropylene]]製[[:microtube]]はある程度薬液に耐えるが､
+一般的には[[:xylene]]に耐性が無いとされているので､
+使用後は中の薬液を排出して乾燥しておいた方が良いと思う。
+また壊れる前に定期的に交換した方が良いと思う。
+プッシュキャップ式の[[:microtube]]は少し不安だが､95℃あたりでもフタが外れることはなかったので､80℃前後で使用していればたぶん大丈夫だと思う。
+<WRAP clear/>
+===== 関連事項 =====
+  * [[dewaxing:study]]