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--- dewaxing [2026/03/29 07:05] – Konajirami-ya
+++ dewaxing [2026/05/18 05:31] (現在) – Konajirami-ya
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 ====== 脱ロウ ======
-<WRAP tdl right 40%>{{:preparation:dewaxing-2.jpg?400x300|}}</WRAP>
+<WRAP tdl right 40%>{{:preparation:dewaxing-3.jpg?400x300|}}
-蝋物質を取り除く処理。
+脱ロウ処理
-蝋物質が残っていると生物顕微鏡で奇麗に見えない。
+</WRAP>
-文献に載っている方法は[[phenol]]が使われるのだけどこれは劇物でありできるだけ使わないようにするため別の方法を実験している。
+蝋物質を取り除く処理。脱脂も兼ねる。
-蝋物質自体は[[:xylene]]や[[:d-limonene]]で溶かすことが出来るがかなり時間が掛かるので湯煎にする。
+蝋物質が残っていると奇麗な標本にはならない。
-容器は[[pp]]製の[[microtube]]を使う(ガラス製の[[test tube]]の法が良いと思うが短いものの入手が難しい)。
-あと脱水剤の意味で少量の[[:ethanol]]か[[:ipa]]を加えたものを薬液として使う。
-順序についても文献に載っている方法ではかなり後に行なわれるが､[[:]]では最初(
+文献に載っている方法では[[xylene]]と[[phenol]]の混合液等が使われるのだけど、
-[[:preparation:removing]]の次)に行う方向でテスト中。
+できるだけ安全に処理できるように別の方法を模索している。
+加温すれば特に[[phenol]]を使わなくても問題無いように思う。
+ただし揮発性が高いので､漏れの少ない[[soaking tube]]を使う。
+蝋物質が少ない場合は加温しなくても良い。
 ===== 道具 =====
-  * 処理容器。2mL程度の透明な[[:polypropylene]]製[[:microtube]]かガラス製[[:test tube]]を使う。底は丸底か浅いV字が良い。フタはスクリューキャップ式でもプッシュキャップ式でも良い。フタが無い場合は脱脂綿(ティッシュペーパーでも可)を使う。
+  * [[soaking tube]]
-  * [[:d-limonene]]。無ければ[[:xylene]]でも可。
+  * [[dewaxing agent]]
-  * [[;ethanol]]か[[:ipa]]
+  * [[etoh:99]]。[[:ipa]]でも可。
   * [[:microtube holder]]。
   * 細口と太口[[:pipette]]
-  * 鍋と水と温度計とコンロ
+  * [[:hot plate]]
 ===== 手順 =====
-(1) 検体を太口[[:pipette]]で処理容器に[[:specimen transferring|移動]]後。媒体を[[:decantation]]する。
+蝋物質が無いと思われる場合も脱脂の意味もあるので行うこと(加温しない方法で良い)。
+-> やらなくて良い場合もある。
-(2) 水分を除くため、[[:ethanol]]か[[:ipa]]ですすぐ。具体的には[[:ethanol]]等を100μLほど加えて軽く振り､細口[[:pipette]]で[[:decantation]]する。検体を吸い込まないように注意すること。
+ロウ物質が多い場合は加温する。
+加温する場合は[[soaking tube]]を使う。
+加温しない場合は[[soaking dish]]で良い。
-(3) [[:xylene]]か[[:d-limonene]]を50〜200μL程度加える。[[:ethanol]]か[[:ipa]]を1滴ぐらい加える(すすいだときの残りがあるので新たに追加しなくても良いかもしれない)。
-(4) 容器にフタをして、80℃程度の湯煎にする。
+==== 蝋物質が多い場合(加温する) ====
-時間は水から入れた場合80℃になった時点でだいたい溶けていると思うが、それから1分ぐらいおく。
+(1) 前処理が[[maceration]]や[[acidification]]等脱水されていない場合は、[[dehydration agent]]で2回ほどすすぐ。容器のフタなどについた水分も拭っておく。
+(2) 検体を[[:soaking tube]]]に移動する。具体的には溶媒ごと太口[[pipette]]で移動するか、チューブに[[etoh:99]]を少量入れて[[microbrush]]で移動する等の方法で行う。
+その後溶媒を細口[[pipette]]で慎重に[[decantation]]する。
+(3) [[dewaxing agent]]を100〜500μL程度加える(検体の量とかワックスの量にもよる)。
+(4) [[:soaking tube]]のフタをしめて60℃程度に加温し1時間ほど静置する。
+その後あるいは途中で[[stereo microscope]]で観察して溶けているようだったら終了する。
 (5) 少し冷ます。
-薬液が少なかった場合、どろどろしたグリース状になるので、
+[[dewaxing agent]]が少なかった場合、どろどろしたグリース状になりピペットで吸い取れないので､
-その場合は[[:xylene]]か[[:d-limonene]]を追加して振ればたぶん溶ける。
+その場合は[[dewaxing agent]]を追加して振ればさらさらになる。
+薄いワックスの膜が見られるようなら、[[dewaxing agent]]で何回かすすぐ。
+==== 蝋物質が少ない場合(常温で処理) ====
+加温しないので[[soaking tube]]に移動する必要はないが、
+あまり長時間[[soaking dish]]に置いておくと蒸散してしまうので注意。
+(1) 容器のフタとかに付いている水分をティッシュペーパー等で除去する。
+(2) [[dehydration agent]]を注意深く(検体を吸い込まないように)[[:decantation]]する。
+(3) [[dewaxing agent]]を200μL〜500μL程度加える。容器によっては多めにしておいた方が良いかもしれない。
+(4) 常温で1時間ほど静置する。-> たぶんそんなにいらない。
+その後あるいは途中で[[stereo microscope]]で観察して溶けているようだったら終了する。
-(6) 次の工程で使用する容器に[[:specimen transferring|移動]]し、[[:decantation]]する。
 ===== 注意点 =====
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 どの薬品も引火性が高いので火災には十分注意すること。
-===== 備考 =====
-溶剤は[[d-limonene]]が入手しやすく、人体への害も少なそうなのでオススメ。
-容器は耐薬品性、透明性の点でガラス製の[[test tube]]方が良いと思うが、
+===== 備考 =====
-検体がくっつきやすいというデメリットもある。
-わざわざ入手する必要もないかなぁ。
+容器について。
-[[:polypropylene]]製[[:microtube]]は一般的には[[:xylene]]に耐性が無いとされているので､
+[[:pp]]は一般的には[[:xylene]]に耐性が無いとされているので､
 使用後は中の薬液を排出して乾燥しておいた方が良いと思う。
 また壊れる前に定期的に交換した方が良いかもしれない。
+その意味ではガラス製のフタ付きの小さな[[test tube]]が良いのだろうけど､適当なものが見つからない。
-プッシュキャップ式の[[:microtube]]は外れないか少し不安だが、[[d-limonene]]や[[xylene]]の沸点は100℃以上なので問題ない。また[[ethanol]]や[[ipa]]の沸点が80℃前後なので、温度を上げすぎなければ大丈夫だと思う。
 <WRAP clear/>