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+++ dewaxing [2026/05/18 05:31] (現在) – Konajirami-ya
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 <WRAP tdl right 40%>{{:preparation:dewaxing-3.jpg?400x300|}}
+脱ロウ処理
 </WRAP>
-蝋物質を取り除く処理。脱脂も同時に行う。
+蝋物質を取り除く処理。脱脂も兼ねる。
 蝋物質が残っていると奇麗な標本にはならない。
-文献に載っている方法では[[xylene]]と[[phenol]]の混合液等が使われるのだけど、[[phenol]]は劇物でありできるだけ使わないようにするため別の方法を模索している。
+文献に載っている方法では[[xylene]]と[[phenol]]の混合液等が使われるのだけど、
-蝋物質自体は[[:xylene]](あるいはその代替品)単独でも溶かすことが出来るようだが、
+できるだけ安全に処理できるように別の方法を模索している。
-常温だとかなり時間が掛かるので60℃で加温する。
+加温すれば特に[[phenol]]を使わなくても問題無いように思う。
-容器は漏れが少ない[[pp]]製の[[microtube]]を使う。
+ただし揮発性が高いので､漏れの少ない[[soaking tube]]を使う。
-水分が含まれるとうまくいかないので先に脱水しておき、
+蝋物質が少ない場合は加温しなくても良い。
-脱水剤の意味で少量の[[:ethanol]]か[[:ipa]]を加えるとうまく行くように思う。
 ===== 道具 =====
-  * 処理容器。2mL程度の透明な[[:polypropylene]]製[[:microtube]]。ガラス製のフタ付きの[[:test tube]]でも良い。底は丸底か浅いV字が良い。
+  * [[soaking tube]]
-  * 脱ロウ剤。[[:xylene]]あるいは代替品(後述)。
+  * [[dewaxing agent]]
-  * 無水[[;ethanol]](99.5%)。[[:ipa]]でも可。
+  * [[etoh:99]]。[[:ipa]]でも可。
   * [[:microtube holder]]。
   * 細口と太口[[:pipette]]
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 ===== 手順 =====
-[[dehydration]]の後に行うこととする。
+蝋物質が無いと思われる場合も脱脂の意味もあるので行うこと(加温しない方法で良い)。
+-> やらなくて良い場合もある。
+ロウ物質が多い場合は加温する。
+加温する場合は[[soaking tube]]を使う。
+加温しない場合は[[soaking dish]]で良い。
-(1) 検体を太口[[:pipette]]で脱水液ごと処理容器に[[:specimen transferring|移動]]後、媒体を注意深く[[:decantation]]する。
-(2) 脱ロウ剤を200μL程度加える(検体の量にもよる)。[[:ethanol]]を1滴ぐらい加える。
+==== 蝋物質が多い場合(加温する) ====
-(3) 容器にフタをして、60℃程度に加温する。ロウ物質の量にもよるが最大1時間ぐらい?
+(1) 前処理が[[maceration]]や[[acidification]]等脱水されていない場合は、[[dehydration agent]]で2回ほどすすぐ。容器のフタなどについた水分も拭っておく。
-(4) 少し冷ます。
+(2) 検体を[[:soaking tube]]]に移動する。具体的には溶媒ごと太口[[pipette]]で移動するか、チューブに[[etoh:99]]を少量入れて[[microbrush]]で移動する等の方法で行う。
-脱ロウ剤が少なかった場合、どろどろしたグリース状になりピペットで吸い取れないので､
+その後溶媒を細口[[pipette]]で慎重に[[decantation]]する。
-その場合は脱ロウ剤を追加して振ればさらさらになる。
-(5) 浅い[[dishes]]に[[:specimen transferring]]する。
+(3) [[dewaxing agent]]を100〜500μL程度加える(検体の量とかワックスの量にもよる)。
-もし、薄いワックスの膜が見られるようなら、脱ロウ剤で何回かすすぐ。
+(4) [[:soaking tube]]のフタをしめて60℃程度に加温し1時間ほど静置する。
+その後あるいは途中で[[stereo microscope]]で観察して溶けているようだったら終了する。
+(5) 少し冷ます。
+[[dewaxing agent]]が少なかった場合、どろどろしたグリース状になりピペットで吸い取れないので､
+その場合は[[dewaxing agent]]を追加して振ればさらさらになる。
+薄いワックスの膜が見られるようなら、[[dewaxing agent]]で何回かすすぐ。
+==== 蝋物質が少ない場合(常温で処理) ====
+加温しないので[[soaking tube]]に移動する必要はないが、
+あまり長時間[[soaking dish]]に置いておくと蒸散してしまうので注意。
+(1) 容器のフタとかに付いている水分をティッシュペーパー等で除去する。
+(2) [[dehydration agent]]を注意深く(検体を吸い込まないように)[[:decantation]]する。
+(3) [[dewaxing agent]]を200μL〜500μL程度加える。容器によっては多めにしておいた方が良いかもしれない。
+(4) 常温で1時間ほど静置する。-> たぶんそんなにいらない。
+その後あるいは途中で[[stereo microscope]]で観察して溶けているようだったら終了する。
-(6) 脱ロウ剤を[[decantation]]し、[[etoh]]を加える。
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 ===== 備考 =====
-脱ロウ剤には以下のようなものが使えると思う。[[d-limonene]]か[[lemosol]]、[[lemosol a]]が人体への害も少なそうなのでオススメ。
-  * [[d-limonene]] シール剝がし用の小容量のものが入手できる。
-  * [[xylene]]
-  * [[histoclear]] (未入手) 量が多いので(約4L)、微小昆虫のプレパラート標本作成だけでは使い切れないと思う。
-  * [[lemosol]] (未入手)
-  * [[lemosol a]]
 容器について。
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 使用後は中の薬液を排出して乾燥しておいた方が良いと思う。
 また壊れる前に定期的に交換した方が良いかもしれない。
+その意味ではガラス製のフタ付きの小さな[[test tube]]が良いのだろうけど､適当なものが見つからない。
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