軟化後、アルカリ性だった検体を酸性にする処理。 アルカリ性のままだと標本を保存中に色が抜けてくるらしい。 またアルカリ性だと酸性フクシンによる染色がうまく行かない。

後の処理で氷酢酸を使う場合にも必要なのだろうか? 水酸化カリウムを氷酢酸で中和すると弱アルカリ性(pH 9.7)の酢酸カリウムが生成される。 できた酢酸カリウムが溶け出せば良いのだけど残留すると結晶化する(かもしれない)。 酢酸カリウムは弱アルカリ性(pH 9.7)で水、アルコールに溶けるらしいが氷酢酸に溶けるか良くわからなかった。　 で、Grok3 beta 先生に聞いてみたところ、酢酸カリウムは氷酢酸にも溶けるらしいので、 後の処理で氷酢酸を使う場合には不要なのかもしれない。 ただし十分時間を掛けるべきと思われる。 染色はかなり時間を掛けるので脱水しか行わない場合に注意。 後の処理で氷酢酸を使わない場合は陽に行う必要がある。。

• 水に浸ける
• 酸性化剤に浸ける

温度と時間!

• 20% 氷酢酸
• 40% 水
• 40% エタノール

文献には塩酸を使う例もあったが、これ使うとどうも染色できなくなるので、 氷酢酸を使うことにした。

氷酢酸と水だけでやっている例もあるようだ。 ソース!

• 30% 水
• 70% 氷酢酸

使用例

食酢、クエン酸とか使えるか。

カイガラムシ

3. Rinsing and acidification 10% KOH solution is a potent base (i.e. strong alkali) and it is necessary to wash it all away with distilled water. Add a drop of detergent or liquid soap to the distilled water to prevent the insect from floating. If the KOH solution is not rinsed away properly, specimens may not stain well or become decolourized after some time. At this stage, any unsightly tracheae and eggs remaining in the body may be carefully extracted through the hole or slit using insect pins, microspatula, small paint brushes etc., ensuring that the body is left in the appropriate shape and dorso-ventrally flattened. After soaking in water for 5-10 minutes, the specimens are then transferred to acidified 80% alcohol (isopropanol or ethyl alcohol) for at least 10 minutes to acidify the cuticle, neutralize any remaining KOH, and start the dehydration process. (Takumasa Kondo, Gillian W. Watson, 2022)

3 70％酢酸液中で洗浄，中和 水酸化カリ液処理が終了した標本は，70％酢酸を入れたシャーレに移して，30 ～ 60 分程度常温で静置する。 このときに水酸化カリ液中に入れた酸性フクシンが発色して虫体がピンク色になり，後の処理で虫体を見失うことがなくなる。 (田中 宏卓, 2014, pp.49)

なるほどー

腹吻亜目

Acidification: Any traces of KOH left in the specimen prevented staining or caused it to decolourize later. Specimens were therefore, rinsed in distilled water for at least 3 minutes to remove KOH from the insects and the spatula, before transfer to acidified 80% alcohol for at least 10 minutes to acidify the cuticle. (UGAI Sirisena, et al., 2013, pp.141)

Kondo, T. & Watson, G. W. (2000) Collection, Preservation, Slide-mounting, … of Scale Insects, 田中 宏卓(2014) カイガラムシの標本作製法, Sirisena, U. et al. (2013) Preparation of Hemiptera …,