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脱ロウ
蝋物質を取り除く処理。 蝋物質が残っていると生物顕微鏡で奇麗に見えない。 文献に載っている方法はフェノールが使われるのだけどこれは劇物でありできるだけ使わないようにするため別の方法を実験している。 蝋物質自体はキシレンやd-リモネンで溶かすことが出来るがかなり時間が掛かるので湯煎にする。 容器はポリプロピレン製のマイクロチューブを使う(ガラス製の試験管の法が良いと思うが短いものの入手が難しい)。 あと脱水剤の意味で少量のエタノールかイソプロピルアルコールを加えたものを薬液として使う。
順序についても文献に載っている方法ではかなり後に行なわれるが、虫の標本Wikiでは最初( 剥離の次)に行う方向でテスト中。 こうすると軟化の時間がかなり短縮でき、 ワックスや油脂の多い検体でも安定して処理できるような気がする。
道具
- 細口と太口ピペット
- 鍋と水と温度計とコンロ。ガスコンロの場合はフタが吹っ飛んだ場合などに怖いので保温できる容器にお湯を入れるようにすると良いかもしれない。
手順
(1) 検体を太口ピペットで処理容器に移動後。媒体を️排液する。
(2) 水分を除くため、エタノールかイソプロピルアルコールですすぐ。具体的にはエタノール等を100μLほど加えて軽く振り、細口ピペットで️排液する。検体を吸い込まないように注意すること。
(3) d-リモネンかキシレン(あるいは代替品)を50〜200μL程度加える(検体の量にもよるがだいたいで)。エタノールかイソプロピルアルコールを1滴ぐらい加える。
(4) 容器にフタをして、80℃程度の湯煎にする。 時間は水から入れた場合80℃になった時点でだいたい溶けていると思うが、それから1分ぐらいおく。 → 脱脂も兼ねるため、5分から10分ぐらい置く。
(5) 少し冷ます。 薬液が少なかった場合、どろどろしたグリース状になるので、 その場合はキシレンかd-リモネンを追加して振ればたぶん溶ける。
(6) 次の工程で使用する容器に移動、️排液し、 エタノールかイソプロピルアルコールですすぐ。
注意点
どの薬品も引火性が高いので火災には十分注意すること。
備考
溶剤は以下のようなものが使えると思う。d-リモネンが入手しやすく、人体への害も少なそうなのでオススメ。 → レモゾールが入手できるかもしれない。
- Histo-Clear (未入手)
- レモゾール (未入手)
- レモゾールA (未入手)
容器について。 ポリプロピレンは一般的にはキシレンに耐性が無いとされているので、 使用後は中の薬液を排出して乾燥しておいた方が良いと思う。 また壊れる前に定期的に交換した方が良いかもしれない。 プッシュキャップ式のマイクロチューブは外れないか少し不安だが、d-リモネンやキシレンの沸点は100℃以上なので問題ない。またエタノールやイソプロピルアルコールの沸点が80℃前後なので、温度を上げすぎなければ大丈夫だと思う。
関連事項
===== 参考文献 ===== ~~REFNOTES~~

